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保持された標的分子の固定化剤抗原性 Oct 26, 2017

Fixing Agentは最初に光学顕微鏡で適用されましたが、光学顕微鏡で使用されるFixing Agentは電子顕微鏡に特に適していませんでした。 人々はその後、オスミウムと中性ホルムアルデヒドの固定化に導入されました。 初期の電子顕微鏡生物学的試料化学固定法は、4つの酸化オスミウム単一固定を使用するが、オスミウムは非常に良好な保存グリコーゲンおよび他の炭水化物を有さず、さらに、組織の浸透速度における4つの酸化オスミウムは比較的遅い。

IHC / ICC実験で使用される全てのサンプルは、組織形態を維持し、標的分子の抗原特性を保存するために固定されなければならない。 組織の化学成分の変更を修正したので、しばしば組織構造を維持し、トレードオフの間にテーブルを保持する必要があります。

細胞または組織の不完全な不動化(不十分な固定化)は、組織中の標的タンパク質の迅速な加水分解をもたらし、特異的な免疫反応性を低下させる可能性がある。 しかし、過度の固定(過度の固定)は、テーブルのシャドーイングまたは強い非特異的バックグラウンド染色を招き、特定のマーキングを不明瞭にする可能性があります。

細胞や組織の形態学的構造を保存し、抗原の免疫活性を最大にすることが最善です。 しかしながら、これまでのところ、標準的な固定流体は、様々な抗原固定化に使用することができない。 同じ静止流体で固定した後、異なる組織は異なる染色結果を示すことがある。 したがって、最良の保持剤を選択するためには、異なる抗原および試料を繰り返し試験しなければならない。

組織サンプルとは異なり、細胞はより短い固定時間およびより低い濃度の固定化された液体を有する。 例えば、室温で20分間2%ホルムアルデヒド溶液であり、しばしば細胞形態および抗原性を保存するのに十分である。

培養細胞の固定は、通常、培地から除去され、固定溶液に添加されるだけである。 しかしながら、培地を除去した後の表面張力の変化は、特定の細胞型を損なう可能性がある。 この場合、定着剤を媒体に直接添加することができる。 例えば、培地と同じ容量の4%ホルムアルデヒドを添加すると、2%ホルムアルデヒド溶液が得られ、これは細胞を予め装填するのに十分である。 2分後、予め固定された培地を新鮮な量の2%固定剤と交換しなければならない。 固定されたステップはセルをより硬くするので、表面張力の変化の可能性のある有害な影響に耐えることができます。